当前位置:首页 > 技术文章

技术文章

猪弓形虫PCR检测试剂盒使用方法
点击次数:237 更新时间:2023-11-07

猪弓形虫PCR检测试剂盒使用方法:

一、样品 DNA 的制备

用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。

二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。

3. 产品仅用于科研先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。

4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。

5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。

6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。7. NC 管中不加任何阳性对照。

8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。


分享到:

加入收藏 | 返回列表 | 返回顶部

©2024上海谷研实业有限公司 版权所有  总访问量:265257 Design By 环保在线 
主营:补体片断5aElisa试剂盒,花生四烯酸Elisa试剂盒,维生素DElisa试剂盒 GoogleSitemap   备案号:沪ICP备12048703号-8

联系人: 马先生
电话:
021-39921927,021-39596320
手机:
15026555973
点击这里给我发消息
点击这里给我发消息
 

环保在线

推荐收藏该企业网站