【中文名称】：人原钙黏素1(PCDH1)ELISA试剂盒 

【英文名称】：Plant calmodulin,CAM ELISA Kit

【产品规格】：96T/48T

【保存条件】：2-8℃低温保存

保存条件与有效期

试剂盒全程2-8℃避光防潮保存，禁止冻存，在规定存储条件下有效期为6个月。

本试剂盒采用双抗体夹心法，仅用于科研场景下定量检测人血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆等生物样本中的PCDH1蛋白浓度，不可用于临床诊断。其板内、板间变异系数均小于12%，具备灵敏度高、特异性强、重复性稳定的特点。

检测原理

试剂盒采用纯化的人PCDH1特异性抗体包被微孔板，依次加入样本中的PCDH1抗原、HRP标记的抗PCDH1抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经充分洗涤后加入TMB底物显色，TMB在HRP催化下转为蓝色，加终止液后变为黄色，颜色深浅与样本中PCDH1含量呈正相关。用酶标仪在450nm波长测定OD值，通过标准曲线即可计算出样本中PCDH1的实际浓度。

样本采集与预处理

‌血清样本‌：血液室温自然凝固10-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟，小心收集上清，若出现沉淀需再次离心。

‌血浆样本‌：选用EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，充分混匀后2000-3000转/分离心20分钟收集上清，‌绝对禁止使用含NaN₃的样本‌，NaN₃会直接抑制HRP酶活性导致结果失效。

‌组织样本‌：称取适量组织，加入预冷PBS缓冲液（pH7.4），冰上充分匀浆，2000-3000转/分离心20分钟收集上清，匀浆过程中需添加蛋白酶抑制剂，避免PCDH1被内源性蛋白酶降解。

‌细胞样本‌：检测胞内PCDH1时，用PBS重悬细胞至浓度100万/mL左右，反复冻融3次破碎细胞，2000-3000转/分离心20分钟收集上清。

‌溶血脂血样本预处理‌：轻度溶血样本用终浓度2% PEG6000沉淀血红蛋白，4℃ 12000rpm离心10分钟取上清；轻中度脂血样本4℃ 15000×g高速离心15分钟，弃去上层乳糜层取下层澄清上清，处理后样本2小时内完成检测。

‌保存要求‌：样本采集后2小时内完成核酸提取，暂不检测的样本分装后-20℃可保存1个月，-80℃可保存6个月，严格避免反复冻融。

详细操作步骤

‌试剂平衡与配制‌：所有冷藏试剂提前30分钟取出，平衡至室温20-25℃；30×浓缩洗涤液用蒸馏水按1:30比例稀释备用。

‌标准品梯度稀释‌：用标准品稀释液将复溶后的PCDH1标准品做倍比稀释，得到5个浓度梯度的标准工作液，同时设置零浓度空白孔。

‌加样‌：分别设置空白孔、标准孔、待测样品孔。标准孔每孔加对应浓度标准品50μL；待测样品孔先加样品稀释液40μL，再加待测样本10μL，样本最终稀释倍数为5倍。加样时将液体加至孔底，避免触碰孔壁，轻轻晃动混匀。

‌第一次温育‌：用封板膜封板后，置于37℃恒温箱温育30分钟。

‌洗板‌：小心揭掉封板膜，弃去孔内液体甩干，每孔加满稀释后的洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗板5次，最后一次在吸水纸上用力拍干所有孔内残留液体。

‌加酶‌：除空白孔外，每孔加入HRP标记抗体工作液50μL。

‌第二次温育‌：再次封板，37℃恒温箱温育30分钟。

‌洗板‌：重复上述洗板操作，同样洗板5次后拍干。

‌显色‌：每孔先加入显色剂A液50μL，再加入显色剂B液50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

‌终止与读数‌：每孔加入终止液50μL终止反应，此时蓝色立即转为黄色；以空白孔调零，15分钟内用酶标仪在450nm波长测定所有孔的OD值，推荐开启630nm作为参比波长扣除背景干扰。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制标准曲线，计算出直线回归方程。将待测样本的OD值代入回归方程，得到的结果乘以5倍样本稀释倍数，即为样本中PCDH1的实际浓度。若样本PCDH1含量过高，超出标准曲线线性范围，需用样品稀释液进一步稀释后复测，最终结果乘以总稀释倍数。