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免疫组织化学技术总结
点击次数:560 更新时间:2017-04-10

PⅢNP Elisa试剂盒实验所用的标本:

实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理切片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

其中石蜡切片是制作组织标本zui常用、zui基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中的组织标本制作方法。

PⅢNP Elisa试剂盒实验所用的抗体:
免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体,单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。

常用的染色方法:
根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中—抗染色法zui常用。

免疫组化实验步骤:

.  石蜡切片置于67℃烘箱中,烘片2小时,脱蜡至水,用pH7.4的PBS冲洗三次,每次3分钟(3×3’)。
2.  取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液,加入微波盒中,微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档微波处理0分钟,取出微波盒流水自然泠却,从缓冲液中取出玻片,先用蒸馏水冲洗两次,之后用PBS冲洗2×3’。(注:不是所有的抗体都需要微波修复的,视具体情况而定)
3.  每张切片加滴3%H2O2,室温下孵育0分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3×3’。

PⅢNP Elisa试剂盒免疫组化特点:
.  在切片加上一抗后,第二抗体标记多聚螯合物酶(HRP)的复合物与一抗结合,在多聚螯合物上有大量的HRP分子,使抗原信号有显著的放大,其敏感性较SABC、SP法高。
2.  由于多聚物在体内不存在,又不使用,从而避免了由于引起的非特异性背景染色,背景比SABC、SP法清晰。

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