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TSZ Elisa试剂盒测定标记技术原理
点击次数:604 更新时间:2017-07-21

TSZ Elisa试剂盒能呈现有色化学反应的酶,原则上均可作为符号用。但作为符号抗体用的酶应满意下列请求:
()来源便利,易于纯化;
(2)比活性高,性质安稳;
(3)ELISA试剂盒酶活性和量能
用简单办法测定。ELISA试剂盒现在在免疫酶技能中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和硷性磷酸酶(AP),其次还有葡萄糖氧化酶,β-半乳糖苷酶、和苹果酸脱氢酶等。
由于辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)比活性高,安稳,分子量小,纯酶简单制备,所以zui常用。HRP广泛散布于植物界,辣根中含量高,ELISA试剂盒它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉而成的糖蛋白,糖含量8%。HRP由多个同功酶构成,分子量为40,000,等电点为PH3~9,酶催化的zui适PH因供氢体不一样而稍有区别,但多在PH5摆布。酶溶于水和58%以下饱和度硫酸铵溶液。ELISA试剂盒HRP的辅基和酶蛋白zui大吸收光谱分别为403nm和275nm,通常以OD403nm /OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表明酶的纯度。高纯度的酶RZ值应在3.0摆布(zui高可达3.4)。RZ值越小,非酶蛋白就越多。值得注意的是,ELISA试剂盒纯度并不表明酶活性,如当酶变性后,RZ值仍可不变。
免疫符号技能是将一些既易TSZ Elisa试剂盒测定又具有高度敏感性的物质符号到特异性抗原或抗体分子上,经过这些符号物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。常用的符号物包含荧光素、酶和放射性核素等,用这3种符号物进行符号的ELISA试剂盒免疫检测技能被称为3大免疫符号技能。现在,运用的免疫符号物还有化学发光物质、铁蛋白和胶体金等。
原理
辣根过氧化物酶(HorserADIsh Peroxidase, HRP)
辣根过氧化物酶 (horse radish peroxidase,简称HRP,EC....7)是植物中研讨得zui深化的一种过氧化物酶,早在20世纪30年代就有人着手从辣根中别离此酶,以后又制备出结晶。本试验是以辣根为质料,经过水的抽提,硫酸铵和丙酮分级别离,再经锌离子纯化,透析除盐,冰冻枯燥,便可得到高纯度的辣根过氧化物酶。
辣根过氧化物酶是一种含亚铁血红素的蛋白质,HRP广泛散布于植物界,它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉而成的糖蛋白,糖含量8%。HRP由多个同功酶构成,Mr在40000摆布,等电点7.2。溶于水,溶解度为5%(W/V),溶液呈棕红色,通明。酶催化的zui适PH因供氢体不一样而稍有区别,但多在pH5摆布。酶溶于水和58%以下的硫酸铵溶液。HRP可溶于0.58饱和度以下的硫酸铵溶液,ELISA试剂盒而0.62饱和度以上则不溶。该酶zui适pH7.0(对愈创木酚为氢给体而言)。在室温下,HRP几周内安稳,加热到63℃,在5min内安稳。氧化复原电势很低,pH6.08时,E 0 =-0.2070V,pH为7.7时,E′0 =-0.2787V。HRP的辅基和酶蛋白zui大吸收光谱分别为403nm和275nm,通常以OD403nm/OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表明酶的纯度。
ELISA试剂盒酶符号物包含酶符号抗原、酶符号抗体和酶符号SPA等。ELISA试剂盒酶符号物质量的好坏直接关系到免疫酶技能的成功与否,因而被称为要害的试剂。酶符号物中zui常用的是酶符号抗体,它是将酶与特异性抗体经适当办法衔接而成。酶符号抗体的质量首要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有杰出的制备办法。现在,高质量的酶(如辣根过氧化物酶,TSZ Elisa试剂盒国内已有产品供给。高质量的抗体则可经过获取纯化而取得。在制备办法上,宜选用产率高、ELISA试剂盒不影响物的活性和不稠浊搅扰性物质且操作简便易行的办法。

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