小鼠支气管平滑肌细胞培养试剂盒说明书

注意事项：
. 接收到小鼠支气管平滑肌细胞培养试剂盒说明书，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞00X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 

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小鼠支气管平滑肌细胞培养试剂盒【Mouse AirwayPrimacellTM：NormalBronchial Smooth Muscle Cells】
     小鼠支气管平滑肌细胞培养试剂盒说明书小鼠支气管平滑肌细胞分离自正常小鼠支气管平滑肌，呈长纺锤形纤维状分布。该细胞在维持气道张力维持支气管形态中起重要作用，气道平滑肌特异的超微结构特点和调节机制是实现气管正常生理功能的基础。 虽然支气管组织机械韧性很强，但利用本公司试剂盒中提供的支气管组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的薄的支气管组织片能使得支气管组织中成支气管细胞的一些功能特性发生改变，从而将成支气管细胞分离开来。

本试剂盒适用于分离培养新生儿或成年人的成支气管细胞。本体系提供了佳的组织分离条件，分离单个细胞的效率是已出版文献中所报道的5~6倍。此外，本体系还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以大程度地降低所培养的成支气管原代细胞中成纤维细胞的含量。 小鼠支气管平滑肌细胞培养试剂盒适合于培养人的成支气管组织细胞。本试剂盒包含： （）OptiTDSTM小鼠支气管平滑肌细胞组织解离液（3×ml） （2）小鼠支气管平滑肌细胞组织处理缓冲液（00ml） （3）FibrOutTM小鼠支气管平滑肌细胞成纤维抑制剂（ml（500x）） （4）小鼠支气管平滑肌组织洗液（5x00 ml） （5）小鼠支气管平滑肌细胞生长因子（ml 500x）及血清（5x0ml） （6）小鼠支气管平滑肌细胞基础培养基（5x00 ml） （7）小鼠支气管平滑肌组织预备液（ x00 ml） （8）小鼠支气管平滑肌细胞培养试剂盒使用说明书​

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum293E(人胚肾细胞（EBNA基因修饰）)

铅色青霉 Penicillium lividum葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum

黑曲霉 Aspergillus niger大肠杆菌 Escherichia coli

RWPE(人前列腺上皮细胞)串珠菌 Leuconostoc lactis

杆菌属 Lactobacillus sp.豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum

根瘤菌MDA-MB-23, 人腺细胞

U4(小鼠子宫颈细胞)酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

日本曲霉 Aspergillus japonicus5637, 人膀胱细胞

燕麦镰孢屎肠球菌 Enterococcus faecium

枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis香菇 Lentinula edodes

小鼠支气管平滑肌细胞培养试剂盒说明书3-甲-4-吡唑分子式：208英文名称：3- methyl -4-：5802-75-2分子量： C4H5IN2

2-甲吡氧物分子式：09.3英文名称：2- methyl pyridine oxide：93-9-分子量： C6H7NO

地肤子皂苷Ic英文名称：Momordin Ic分子式：764.93906分子量：C4H64O3：96990-8-0

五味子提取物英文名称：Extract of Fructus分子式：分子量：：

2-(5-溴-2-吡偶氮)-5-二甲酚分子式：32.8英文名称：2- (5-) -5- two：50783-82-9分子量： C3H3BrN4O

重铬酸喹啉分子式：476.33英文名称：Dichromate quinoline：56549-24-7分子量： C8H6Cr2N2O7

2-氯-5-氯甲吡分子式：62.02英文名称：2- -5- chloride：70258-8-3分子量： C6H5Cl2N

6-氮杂胸腺嘧分子式：27.英文名称：6- azathymine：932-53-6分子量： C4H5N3O2

菲英文名称：Philippines分子式：78.23分子量： C4H0：3055

胺蓝（水溶）英文名称： blue (Shui Rong)分子式：737.72分子量： C32H25N3Na2O9S3：2863-66-5

培养步骤：
小鼠支气管平滑肌细胞培养试剂盒说明书对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按：2到：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。