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填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次说明书

填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次说明书

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填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次说明书是一种在较高温度下保存 RNA 样品的非冻型无毒溶液,它能 迅速渗入细胞内,通过高效抑制 RNase 的活性而保存 RNA 的完整性。

填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次说明书 详细资料

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注意事项:
填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次说明书● 溶液PE *次使用前请按瓶上标签加入4 倍体积的无水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 无水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。
● 本产品对电泳使用的Agarose 种类没有严格限制,可以使用普通Agarose 。为了保证回收DNA 的质量和DNA 回收效率,希望使用高纯度的Agarose ,但没有必要一定要使用低熔点的Agarose 等。
● 电泳时请使用新鲜配制的TAE 电泳缓冲液,以免影响电泳及回收效果。
● 请适当延长电泳时间,在条带分离清晰后进行切胶回收,以免回收到多余杂带。
● 为提高DNA 回收收率,切胶时应尽量除去多余的胶块。
● 本试剂盒纯化柱的DNA 吸附能力强。但如果DNA 浓度小,或DNA 初始量少,回收率将会偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA 片段可直接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。
● 为了保证回收效率,请不要使用未调整pH 值的超纯水洗脱目的片段。
● 请严格按照操作步骤操作。

问:常用的DNA 浓度及纯度检测方法有哪些?
填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次说明书答:回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。琼脂糖凝胶电泳通过对比定量的Marker 来定量浓度;紫外分光检测OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之间说明所得  DNA  纯度较好,如果洗脱时不使用溶液Eluent而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但不表示纯度低。

问:长片段回收时应注意哪些问题?
答:填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次说明书当DNA 片段长度较长(5   kb 以上)时,回收效率会有所下降,这是DNA 切胶回收时的常见现象。此时建议按以下方法解决问题:
    1 适当增加待回收DNA 样品的点样量;
    2 由于长片段DNA 不易从树脂上洗脱下来,建议洗脱两次,可以提高洗脱效率;
    3 减少操作过程中对长片段DNA 的物理损伤,如混合振荡操作不要过于剧烈,切胶时不要将DNA 长时间暴露在紫外等下。

土荆皮乙酸 CAS 82508-31-4 订购|咨询  规格: 20mg

蟾灵;Bufalin CAS 465-21-4 订购|咨询  规格: 20mg

儿茶素 CAS 154-23-4 订购|咨询  规格: 20mg

表告依春;Goitrine Ep CAS号: 1072-93-1 规格: 20mg 订购|咨询

甲;纯品型;标准品;有证书 CAS 39515-41-8 订购|咨询  规格: 0.1g

欧夹竹桃苷;Oleandrin CAS号: 465-16-7 规格: 20mg 订购|咨询

 CAS 6627-72-1 订购|咨询  规格: 20mg

去甲泽拉木醛 CAS 107316-88-1 订购|咨询  规格: HPLC≥98%,20mg/支

7-羟基千金子二萜醇;7β-Hydrox CAS号: 34208-98-5 规格: 20mg 订购|咨询

棕榈酸乙酯 CAS 628-97-7 订购|咨询  规格: HPLC≥98%;20mg

醇杂质Ⅰ CAS  订购|咨询  规格: 50mg

填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次说明书前列腺素E受体2(EP2)elisa检测试剂盒 英文名称:EP2 ELISA Kit, 英文缩写:EP2,

细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH PX)活性酶动力比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次

 冰冻切片组织CASPASE-4蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 进口/国产 规格:10/20次

10% TWEEN 20溶液 进口/国产 规格:100毫升

血管性血友病因子裂解蛋白酶(vWFcp)elisa检测试剂盒 英文名称:vWFcp ELISA Kit, 英文缩写:vWFcp,

粘蛋白4(MUC4)elisa检测试剂盒 英文名称:MUC4 ELISA Kit, 英文缩写:MUC4,

大量全血基因组DNA纯化试剂盒 进口/国产 规格:10次

着丝粒蛋白E(CENPE)elisa检测试剂盒 英文名称:CENPE ELISA Kit, 英文缩写:CENPE,

子细胞氧化应激活性氧(ROS)WST-1比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:50次

5脂加氧酶(5-LO/LOX)elisa检测试剂盒 英文名称:5-LO/LOX ELISA Kit, 英文缩写:5-LO/LOX,

通用型CHIP DNA分子库构建试剂盒 进口/国产 规格:10次

 

操作步骤:
1  填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次说明书切取含有目的DNA 片段的琼脂糖凝胶条带。
   ● 尽量切除不含有目的DNA 部分的凝胶,减少凝胶体积,提高DNA 回收率。
   ● 切胶时,请使用长波长UV  (360 nm )光盒。且不要将DNA 长时间暴露在紫外灯下,以防DNA 损伤。
2  称取凝胶的重量近似地确定其体积。
   ● 凝胶重量的称量方法:取1.5 ml 离心管电子天平称初质量,切胶装在离心管后称终质量,两者差即为胶的质量。不同厂家离心管的重量可能有差异,因此,每个离心管的重量需单独称量。
3  按照每100 mg 琼脂糖凝胶对应100 µl 溶液BD 的比例,向离心管中加入溶液BD。
4  50 ℃水浴7-10min,直至凝胶完全溶化。期间需要振荡混合3 次。
   ● 琼脂糖必须完全融化,以免堵塞柱子,严重影响DNA 段的回收效率。
   ● 如果总体积大于500 µl,可适当增加溶胶时间。
   ● 若此时溶液变红,可加10 µl 3M NaAC  (pH 5.2)。
5  将步骤4 所获溶液置于DNA 纯化柱中,静置2min 。
   ● 胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在较高温度时结合DNA  的能力较弱。
6  12,000 rpm 离心1min。若溶液量大于DNA 纯化柱的容积,可分两次离心,弃滤液。
   ● 此时DNA 被吸附于DNA 纯化柱中的硅胶膜上。
7  加入500 µl 溶液BD。12,000 rpm,  离心1min,弃滤液
8  加入500 µl 溶液PE。12,000 rpm,  离心1min,弃滤液。
   ● 溶液PE 初次使用前用无水乙醇按1: 4 稀释,即含80% 乙醇。
   ● 此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱,以获得高质量DNA 段。
9  加入500 µl 溶液PE。12,000 rpm,  离心1min,弃滤液。
10 12,000 rpm 离心  3min ,以彻底去除纯化柱中的液体。
   ● 此步骤的作用是去除残留乙醇,避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DNA 段的充分溶解。
11  将离心柱置于新的1.5 ml 离心管中。向纯化柱的中央处,悬空滴加30-100 µl 溶液Eluent  (60℃预热),静置2min 。12,000 rpm  离心1min,管底即为目的DNA 段。贮存于-20℃。
   ● 溶液Eluent 可用无菌双蒸水代替,但其pH 需为8.0-8.5,加入体积视DNA 目的段的多少、用户对目的浓度要求而定。
   ● 对溶液Eluent 60℃预热,会提高提取DNA 目的段的产量。

 

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