小鼠皮下结缔组织细胞；L Wnt-3A图片

培养步骤：
小鼠皮下结缔组织细胞；L Wnt-3A图片对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按：2到：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

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细胞名称 小鼠皮下结缔组织细胞；L Wnt-3A图片
形态特性 成纤维细胞

生长特性 贴壁生长

特征特性 L-M(TK-) cells (ATCC CCL-.3) 用Wnt-3A表达载体转染并在含G48的培养基中筛选稳转株。 Wnt-3A基因编码一个有变异的信号功效分泌性糖蛋白。 Wnt基因控制胚胎发过程中的许多模式形成和生长事件。 这些细胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。 它们是目前Wnt-3A条件培养基的好来源。 由于这种条件培养基还包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，对于涉及Wnt-3A条件培养基的实验有必要用其来源细胞株(ATCC CRL-2648)作对照。

培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-2 4.5g/Liter Glucose) 胎牛血清，0%；0.4 mg/ml G-48

传代方法 消化3-5分钟。:2。3天内可长满。

传代情况 PN5

冻存条件 *培养基+8%DMSO

支原体检测 阴性

STR

同工酶

染色体

注意事项：
. 接收到小鼠皮下结缔组织细胞；L Wnt-3A图片，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞00X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 ​

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