SK-BR-3 SKBR3 (人乳腺腺癌细胞)

细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

SK-BR-3 SKBR3 (人乳腺腺癌细胞)

商品属性

商品介绍

别称 SK-Br-3; Sk-Br-3; SK BR 03; SKBR-3; SKBr-3; SK-BR3; SKBr3; SkBr3; SKBR3

种属 人类

年龄（性别） 女性，43岁

组织来源 乳腺；乳房；肋膜渗出液转移灶

生长特性 贴壁细胞

细胞形态 上皮细胞样

参考资料(来源文献)

生物安全等级 1

生长培养基 McCoy’s 5A＋10% FBS＋1% P/S

推荐传代比例 1:2-1:4

推荐换液频率 2~3次/周

倍增时间 ~48-72小时

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

致瘤性 Yes, in nude mice; forms poorly differentiated adenocarcinoma.

受体表达情况 Blood Type A; Rh+; HLA A11, Bw22 (+/-), B40, B18

注意事项 1. SK-BR-3细胞从冷冻保存中恢复的速度可能很慢。SK-BR-3细胞在低温保存恢复过程中的附着会很轻。这很正常。这种细胞系在培养的整个第一周以及每次继代培养后都表现出松散的附着和漂浮的细胞，这并不少见； 2. 如果存在大量漂浮物，尤其是在生长的第一周，在启动复苏后几天内保持细胞不受干扰。如果仍然有很多漂浮物，用台盼蓝检查生存能力。通过轻轻离心保留漂浮细胞，并在更换培养基时将其与附着的细胞一起添加回同一培养容器中，这一点很重要。不要分离或丢弃漂浮细胞。细胞最初以小斑块或细胞群的形式附着，许多细胞团仍处于悬浮状态。几天后，生长将从贴壁细胞群向外延伸。通常也会出现一些细胞碎片。漂浮细胞应始终通过温和离心（125 x g，持续5至7分钟）保留，并在换液或传代后放回培养容器； 3. SK-BR-3细胞倾向于相互堆积。在细胞达到70-80%汇合度之前不要用消化处理细胞。如果让细胞过度生长，细胞就会分离漂浮。

细胞传代培养操作步骤：

（1）当显微镜下细胞形态和生长密度达到90%时，进行传代。

（2）吸弃培养液。添加PBS清洗1~2次，摇匀后弃掉。

（3）加入覆盖瓶底量的且含有EDTA。

（4）培养瓶放入37℃培养箱进行消化，3min左右拿出，用显微镜观察细胞有无超过80%的量，发生收缩变圆、细胞间隙变大。轻轻拍打培养瓶使剩余细胞脱落，加入2倍量的中止消化，并吹打均匀，避免消化过度。

（5）细胞悬液吸至离心管内，1000rpm/min离心3~5min。

（6）吸弃上清，加入培养液重悬细胞，吹打细胞使其均匀分散。

（7）吸弃细胞悬液，选择适合的密度接种到新培养瓶中，补充培养液并摇匀，放置37℃的CO2培养箱进行培养。

（8）根据细胞生长状态确定换液或传代时间。

（9）细胞冻存

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

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