细胞处理:
1) 冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
VCaP (人前列腺癌细胞)
商品属性
种属 | 人 | 规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
生长特性 | 贴壁 | 鉴定 | STR鉴定正确 |
细胞形态 | 上皮细胞样 | 编号 | GOY-01X0240 |
商品介绍
别称 VCAP; Vcap; Vertebral Cancer of the Prostate
种属 人类
年龄(性别) 男性,59岁
组织来源 器官:前列腺; 组织:脊椎转移; 疾病:癌
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样
参考资料(来源文献)
VCaP细胞是于1997年从一位不受激素影响的前列腺癌患者脊椎转移灶中建立的细胞株。VCaP细胞先在小鼠中进行异种移植传代,随后进行体外培养;体内及体外VCaP细胞都对雄性激素敏感。最近发现,前列腺癌细胞Vcap细胞在异种移植到小鼠时可能需要小鼠亲异逆转录病毒Bxv-1。 |
生物安全等级 2
生长培养基 DMEM+10% FBS+1% P/S
推荐传代比例 1:2-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
倍增时间 ~53-144小时
冻存条件
冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
培养条件
气相:空气,95%;CO2,5%
温度:37℃
致瘤性 Yes, in nude and SCID mice.
抗原表达情况 cytokeratin-18; Homo sapiens, expressed p53 antigen; Homo sapiens, expressed prostate specific antigen (PSA); Homo sapiens, expressed prostatic acid phosphatase (PAP); Homo sapiens, expressed Rb protein; Homo sapiens, expressed
基因表达情况 cytokeratin-18; Homo sapiens, expressed, p53 antigen; Homo sapiens, expressed, prostate specific antigen (PSA); Homo sapiens, expressed, prostatic acid phosphatase (PAP); Homo sapiens, expressed, Rb protein; Homo sapiens, expressed
注意事项 该细胞贴壁疏松,影响细胞生长,建议使用多聚-L-赖氨酸溶液包被培养瓶后进行培养,请提前准备多聚-L-赖氨酸溶液。
细胞传代培养操作步骤:
(1)当显微镜下细胞形态和生长密度达到90%时,进行传代。
(2)吸弃培养液。添加PBS清洗1~2次,摇匀后弃掉。
(3)加入覆盖瓶底量的且含有EDTA。
(4)培养瓶放入37℃培养箱进行消化,3min左右拿出,用显微镜观察细胞有无超过80%的量,发生收缩变圆、细胞间隙变大。轻轻拍打培养瓶使剩余细胞脱落,加入2倍量的中止消化,并吹打均匀,避免消化过度。
(5)细胞悬液吸至离心管内,1000rpm/min离心3~5min。
(6)吸弃上清,加入培养液重悬细胞,吹打细胞使其均匀分散。
(7)吸弃细胞悬液,选择适合的密度接种到新培养瓶中,补充培养液并摇匀,放置37℃的CO2培养箱进行培养。
(8)根据细胞生长状态确定换液或传代时间。
(9)细胞冻存
细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
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