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新技术用来在现场直接检测蚊子中可能存在的寨卡病毒
点击次数:758 更新时间:2017-05-08

TSZ Elisa试剂盒在一项新的研究中,来自美国、巴西、尼加拉瓜和德国的研究人员开发出一种新的技术而使得通过捕捉和测试蚊子来监控寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)传播能够变得更加快速和更加低廉。这种基于环介导等温扩增反应(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)的检测方法能够区分寨卡病毒亚洲毒株和非洲毒株,而且在理论上可能被用来在现场直接检测蚊子中可能存在的寨卡病毒。

美国普渡大学的Richard Kuhn(未参与这项研究)说,“你能够仅是捕捉蚊子,将它们磨碎,或者获得被感染者的血液样品和其他类型的样品,随后直接检测寨卡病毒是否存在。你不必进行RNA纯化,你也不必执行逆转录步骤,因而真正地简化这个过程。”

随着寨卡病毒感染在新的地方出现,TSZ Elisa试剂盒利用一种廉价的简易的现场检测方法可更加简单地监控蚊子、进行诊断和鉴定寨卡病毒毒株。

正如聚合酶链式反应(PCR)那样,LAMP利用序列匹配的引物扩增靶DNA序列。但是不同的是,PCR需要让反应试剂混合液不断循环地经历不同的温度,而LAMP是在恒定的63° C下进行的。这意味着无需购买价格在.5万美元到2万美元的PCR热循环仪,而仅需构建250美元的加热块(heat block)。

寨卡病毒是一种RNA病毒,扩增它的核酸需要先通过逆转录步骤将其转化为DNA。一种逆转录酶执行这种转化,并被用于RT-PCR和逆转录-环介导等温扩增反应(RT-LAMP)之中。但是已存在一些证据证实用于LAMP测定中的嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)DNA聚合酶也能够发挥着逆转录酶的作用。确实,Rovnak已发现这种酶的逆转录酶活性是“非常令人印象深刻的”,这意味着它能够同时执行DNA转化步骤和扩增步骤。

Rovnak说,省掉这个逆转录步骤和使用简单的加热块,当然会让这种检测比RT-PCR测定更加廉价和便于携带。但是,如何首先分离寨卡病毒RNA?Rovnak也有一种简单的现场友好的解决方案。

这种方案就是仅需磨碎携带寨卡病毒的蚊子,将它们加入到含有LAMP反应试剂的试管中,在63° C下孵育,Rovnak团队能够强健地扩增寨卡病毒RNA。在5只感染上寨卡病毒的蚊子中,他们能够准确地全部检测到,而且在3只未感染上寨卡病毒的蚊子中,他们均未检测到这种病毒的存在。

考虑到将这种测定方法用于病人诊断,Rovnak团队接着直接扩增来自被感染者的血浆、血清的寨卡病毒亚洲毒株,不过这也会产生一些假阳性和假阴性。Rovnak说,这是由于“尚不确定的抑制物质”。

TSZ Elisa试剂盒在这种LAMP方法能够成为一种诊断工具之前,它需要更一步的开发,但是鼓舞人心的是,它是与RT-PCR那样是稳健的、准确的和敏感的,但是试剂成本下降了“大约一半”。

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